木板油畫168×130 cm來自於路易十三的收藏
精心創作一幅以聖母子和聖安娜為主體，外加小施洗約翰或小羔羊，或後兩者同時出現的群像，這構想在達·芬奇生命的最後20年中時常浮現於他的腦海，並最終有至少四幅真人大小的不同版本作品誕生於世：三幅素描草圖和一幅彩色油畫。盧浮宮收藏的這一幅，1517年在達·芬奇位於克盧城堡的書房內現身，後被紅衣主教黎塞留買下，將其獻給了國王路易十三。畫上的人物形象無疑是從古典藝術中汲取的靈感，不過，為了追求更為強烈的動態效果，達·芬奇放棄了現存於倫敦國家美術館的那副素描草圖所採用的恢弘的構圖形式，非但沒有使所有人物結合成統一的整體，並且還賦予聖母一個趨向於群像外的堅定的動作，而由聖安娜穩定的造型來平衡構圖。達·芬奇親筆繪製的極為出色的素描稿和其他藝術家對這幅作品的臨摹畫，使這幅《聖母子與聖安娜》的作者歸屬不言自明。與畫面近景相距甚遠的遠景體現了達·芬奇對地質學的研究，岩石的層理和運用「空間透視法」成功表現的逐漸消失在空氣中的自然風景，均是對達·芬奇原作者身份的有力證明。